cas：1239946-52-1，F(xiàn)M 4-64是一種膜選擇性紅色熒光染料，屬于苯乙烯基吡啶染料的 FM 家族，具有親脂性，能夠特異性結(jié)合細(xì)胞膜和內(nèi)膜細(xì)胞器（如液泡膜、核膜、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等），并發(fā)出強烈的紅色熒光。以下是關(guān)于 FM 4-64 的詳細(xì)介紹：

一、基本信息

• 中文名：苯乙烯基染料 FM 4-64（或 NeurotransRed C2、SynaptoRed™ C2）

• 英文名：FM 4-64

• CAS 號：1239946-52-1

• 分子式：C??H??Br?N?

• 分子量：607.51

• 外觀性狀：紫色固體粉末

• 溶解性：溶于水、DMSO（二甲基亞砜）等大部分有機溶劑

• 儲存條件：-20℃ 避光干燥保存，避免反復(fù)凍融

結(jié)構(gòu)式：

二、熒光特性

• 最大激發(fā)波長：558 nm

• 最大發(fā)射波長：734 nm

• 熒光強度：高熒光強度，適用于熒光顯微鏡、流式細(xì)胞儀等設(shè)備的觀察

• 熒光穩(wěn)定性：具有良好的化學(xué)穩(wěn)定性和光穩(wěn)定性，可在實驗過程中保持穩(wěn)定的熒光信號

三、作用機制

FM 4-64 是一種親脂性染料，其分子結(jié)構(gòu)中的親脂性尾部（兩個碳鏈）和帶陽離子的高親水性頭部使其能夠插入脂膜表面。在水溶液中，F(xiàn)M 4-64 基本無熒光；但一旦與細(xì)胞膜或內(nèi)膜細(xì)胞器結(jié)合，其熒光強度會顯著增強，從而實現(xiàn)對細(xì)胞膜和內(nèi)膜細(xì)胞器的特異性標(biāo)記。

四、應(yīng)用領(lǐng)域

1. 細(xì)胞膜和內(nèi)膜細(xì)胞器標(biāo)記：

• FM 4-64 可用于標(biāo)記活細(xì)胞或固定細(xì)胞的細(xì)胞膜、液泡膜、核膜、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等內(nèi)膜細(xì)胞器，觀察其形態(tài)和動力學(xué)變化。

• 在酵母細(xì)胞中，F(xiàn)M 4-64 是研究液泡分裂、融合以及液泡蛋白質(zhì)分揀蛋白突變體液泡形態(tài)的重要工具。

2. 胞吞和胞吐作用研究：

• FM 4-64 可用于示蹤酵母整體膜的內(nèi)吞化和運輸?shù)揭号莸倪^程，研究胞吞和胞吐作用的機制。

• 通過觀察 FM 4-64 標(biāo)記的膜結(jié)構(gòu)的動態(tài)變化，可以揭示細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)運輸和能量轉(zhuǎn)換的奧秘。

3. 囊泡運輸研究：

• FM 4-64 可用于標(biāo)記囊泡膜，觀察囊泡的形成、運輸和融合過程，研究囊泡運輸?shù)姆肿訖C制。

4. 細(xì)胞器組織研究：

• FM 4-64 可用于研究細(xì)胞器的組織結(jié)構(gòu)和功能關(guān)系，揭示細(xì)胞器在細(xì)胞生命活動中的作用。

5. 雙色實時觀察：

• FM 4-64 與呈綠色熒光的 FM 1-43 在合適的濾片下能夠區(qū)分開，允許雙色實時觀察膜的再循環(huán)過程。

五、使用注意事項

1. 避光操作：

• FM 4-64 是一種熒光染料，對光敏感。在儲存、配制和使用過程中應(yīng)嚴(yán)格避光，以防止熒光淬滅。

2. 避免反復(fù)凍融：

• FM 4-64 固體粉末在反復(fù)凍融過程中容易降解或失活。因此，應(yīng)將儲存液分裝后保存，避免反復(fù)凍融。

3. 現(xiàn)配現(xiàn)用：

• FM 4-64 工作液應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用，以保證其熒光強度和穩(wěn)定性。長時間放置會導(dǎo)致熒光淬滅或染料降解。

4. 控制濃度和孵育時間：

• 在使用 FM 4-64 進行細(xì)胞標(biāo)記時，應(yīng)控制染料的濃度和孵育時間。過高的濃度或過長的孵育時間可能導(dǎo)致非特異性標(biāo)記或細(xì)胞毒性。

5. 注意細(xì)胞類型和實驗條件：

• 不同細(xì)胞類型對 FM 4-64 的敏感性和標(biāo)記效果可能存在差異。因此，在使用前應(yīng)進行預(yù)實驗，優(yōu)化實驗條件。

六、優(yōu)勢與局限性

• 優(yōu)勢：

• 高熒光強度和穩(wěn)定性：FM 4-64 具有高熒光強度和良好的光穩(wěn)定性，適用于長時間觀察和動態(tài)過程研究。

• 特異性標(biāo)記：FM 4-64 能夠特異性結(jié)合細(xì)胞膜和內(nèi)膜細(xì)胞器，實現(xiàn)對這些結(jié)構(gòu)的精確標(biāo)記。

• 水溶性好：FM 4-64 具有良好的水溶性，便于實驗操作和制備。

• 與生物分子結(jié)合能力強：FM 4-64 可以與蛋白質(zhì)、核酸等生物分子結(jié)合，為研究這些分子的功能和結(jié)構(gòu)提供便利。

• 局限性：

• 熒光淬滅問題：所有熒光染料都存在淬滅問題，F(xiàn)M 4-64 也不例外。在保存和操作過程中應(yīng)嚴(yán)格避光，以防止熒光淬滅。

• 細(xì)胞毒性：雖然 FM 4-64 對細(xì)胞無毒性或毒性較低，但在高濃度或長時間孵育條件下仍可能對細(xì)胞產(chǎn)生一定影響。因此，在使用時應(yīng)注意控制染料的濃度和孵育時間。

cas：1239946-52-1，F(xiàn)M 4-64

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