新藤黃酸-牛血清白蛋白偶聯(lián)物的制備方法主要有以下幾種：

碳二亞胺法（EDC/NHS）

• 原理：碳二亞胺（EDC）可活化新藤黃酸的羧基，形成活潑的中間體，再與牛血清白蛋白（BSA）的氨基反應(yīng)，形成穩(wěn)定的酰胺鍵，從而實(shí)現(xiàn)偶聯(lián)。

• 步驟：

• 將新藤黃酸和牛血清白蛋白分別溶解在適當(dāng)?shù)木彌_液中，如PBS（pH 7.4）。

• 向新藤黃酸溶液中加入EDC和NHS，室溫下攪拌反應(yīng)一段時(shí)間，使新藤黃酸的羧基活化。

• 將活化后的新藤黃酸溶液緩慢滴加到牛血清白蛋白溶液中，室溫下繼續(xù)攪拌反應(yīng)數(shù)小時(shí)至過夜。

• 反應(yīng)結(jié)束后，通過透析或超濾等方法去除未反應(yīng)的小分子物質(zhì)，得到純化的新藤黃酸-牛血清白蛋白偶聯(lián)物。

戊二醛法

• 原理：戊二醛具有兩個(gè)醛基，可與新藤黃酸和牛血清白蛋白的氨基分別反應(yīng)，形成席夫堿，從而將兩者偶聯(lián)在一起。

• 步驟：

• 將新藤黃酸和牛血清白蛋白分別溶解在適當(dāng)?shù)木彌_液中。

• 向新藤黃酸溶液中加入適量的戊二醛溶液，室溫下攪拌反應(yīng)一段時(shí)間。

• 將牛血清白蛋白溶液加入到上述反應(yīng)體系中，繼續(xù)攪拌反應(yīng)數(shù)小時(shí)。

• 反應(yīng)結(jié)束后，通過透析或超濾等方法去除未反應(yīng)的戊二醛和其他小分子雜質(zhì)，得到新藤黃酸-牛血清白蛋白偶聯(lián)物。

其他方法

• 點(diǎn)擊化學(xué)法：利用點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)，如疊氮-炔烴環(huán)加成反應(yīng)等，將含有特定官能團(tuán)的新藤黃酸衍生物與牛血清白蛋白進(jìn)行偶聯(lián)。

• 酶促偶聯(lián)法：利用特定的酶催化新藤黃酸與牛血清白蛋白之間的反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)兩者的偶聯(lián)。

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