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葉酸-辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記物在免疫檢測(cè)中的應(yīng)用原理是什么?

2024-10-18 [73]

葉酸-辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記物|Folic Acid-Peroxidase Conjugate(FA-HRP)

葉酸 - 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記物在免疫檢測(cè)中的應(yīng)用原理主要基于抗原 - 抗體的特異性結(jié)合以及辣根過(guò)氧化物酶的催化特性,具體如下:

 

1.抗原 - 抗體特異性結(jié)合:

葉酸的靶向性:葉酸對(duì)某些細(xì)胞表面或生物分子上的葉酸受體具有高度的特異性親和力。在免疫檢測(cè)的體系中,待檢測(cè)的樣本中如果存在含有葉酸受體的目標(biāo)物質(zhì)(如特定的細(xì)胞、蛋白質(zhì)等),葉酸部分能夠與這些目標(biāo)物質(zhì)上的葉酸受體特異性地結(jié)合。這種特異性結(jié)合就像是一把 鑰匙" " 的關(guān)系,確保了標(biāo)記物能夠準(zhǔn)確地識(shí)別并結(jié)合到目標(biāo)上,為后續(xù)的檢測(cè)提供了基礎(chǔ)。

抗體的識(shí)別作用:在免疫檢測(cè)中,通常還會(huì)使用針對(duì)目標(biāo)物質(zhì)的特異性抗體(一抗)。如果目標(biāo)物質(zhì)是一種蛋白質(zhì)抗原,一抗能夠與該抗原特異性結(jié)合。當(dāng)葉酸 - 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記物中的葉酸與目標(biāo)物質(zhì)結(jié)合后,抗體也會(huì)與目標(biāo)物質(zhì)上的相應(yīng)抗原表位結(jié)合,進(jìn)一步增強(qiáng)了標(biāo)記物與目標(biāo)物質(zhì)的結(jié)合特異性和穩(wěn)定性。這樣就形成了葉酸 - 目標(biāo)物質(zhì) - 抗體的復(fù)合物。

2.辣根過(guò)氧化物酶的催化反應(yīng):

酶促反應(yīng)的啟動(dòng):辣根過(guò)氧化物酶能夠催化特定的底物發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。當(dāng)葉酸 - 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記物與目標(biāo)物質(zhì)結(jié)合后,加入辣根過(guò)氧化物酶的底物。在有過(guò)氧化氫存在的條件下,辣根過(guò)氧化物酶會(huì)催化底物發(fā)生氧化反應(yīng)。

信號(hào)的產(chǎn)生與檢測(cè):底物被辣根過(guò)氧化物酶催化氧化后,會(huì)產(chǎn)生顏色變化、發(fā)光等可檢測(cè)的信號(hào)。例如,常用的底物四甲基聯(lián)苯胺(TMB)在被辣根過(guò)氧化物酶催化后會(huì)由無(wú)色變?yōu)樗{(lán)色,加入酸終止反應(yīng)后又變?yōu)辄S色。通過(guò)檢測(cè)這種信號(hào)的強(qiáng)度,可以間接反映出樣本中目標(biāo)物質(zhì)的存在量。信號(hào)越強(qiáng),說(shuō)明樣本中目標(biāo)物質(zhì)的含量越高,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)物質(zhì)的定性或定量檢測(cè)。

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