遠(yuǎn)志皂苷元-過(guò)氧化物酶標(biāo)記物|Senegenin-Peroxidase Conjugate(Senegenin-HRP)

以下是一些可以檢測(cè)遠(yuǎn)志皂苷元 - 過(guò)氧化物酶標(biāo)記物活性的方法：

比色法

原理：過(guò)氧化物酶在有過(guò)氧化氫存在的條件下，能使愈創(chuàng)木酚氧化生成茶褐色物質(zhì)，該物質(zhì)在 470nm 處有最大吸收，通過(guò)分光光度計(jì)測(cè)量 470nm 處的吸光度變化來(lái)測(cè)定過(guò)氧化物酶活性，進(jìn)而反映遠(yuǎn)志皂苷元 - 過(guò)氧化物酶標(biāo)記物的活性。

步驟：

制備反應(yīng)混合液：在 100mmol/L 磷酸緩沖液（pH 6.0 或 pH 7.0）50ml 燒杯中，加入愈創(chuàng)木酚 28μl，于磁力攪拌器上加熱攪拌直至愈創(chuàng)木酚溶解，待溶液冷卻后，加入 30% 過(guò)氧化氫 19μl，混合均勻，保存于冰箱中。

樣品處理：稱(chēng)取適量含有遠(yuǎn)志皂苷元 - 過(guò)氧化物酶標(biāo)記物的樣品，如組織樣品 1g，剪碎后放入研缽中，加適量的磷酸緩沖液研磨成勻漿，以 4000r/min 離心 10 - 15min，上清液轉(zhuǎn)入 100ml 容量瓶中，殘?jiān)儆?5ml 磷酸緩沖液提取一次，上清液并入容量瓶中，定容至刻度，貯于低溫下備用1810。

比色測(cè)定：取光徑 1cm 比色杯 2 只，于 1 只中加入反應(yīng)混合液 3ml 和磷酸緩沖液 1ml，作為對(duì)照；另 1 只中加入反應(yīng)混合液 3ml 和上述酶液 1ml（如酶活性過(guò)高可稀釋之），立即開(kāi)啟秒表記錄時(shí)間，于分光光度計(jì)上測(cè)量波長(zhǎng) 470nm 下吸光度值，每隔 1min 讀數(shù)一次。

結(jié)果計(jì)算：以每分鐘吸光度變化值表示酶活性大小，即以 ΔA470/（min?g（鮮重））表示之。也可以用每 min 內(nèi) A470 變化 0.01 為 1 個(gè)過(guò)氧化物酶活性單位（U）表示110。

電化學(xué)測(cè)定法

原理：以過(guò)氧化氫、對(duì)苯二酚為酶的底物，測(cè)定加入過(guò)氧化氫后電流變化斜率與酶活之間的線(xiàn)性關(guān)系，從而快速、靈敏地測(cè)定總過(guò)氧化物酶的活性。

步驟：

準(zhǔn)備工作電極、參比電極和對(duì)電極，構(gòu)建電化學(xué)檢測(cè)體系。

配制含有過(guò)氧化氫和對(duì)苯二酚的底物溶液。

將含有遠(yuǎn)志皂苷元 - 過(guò)氧化物酶標(biāo)記物的樣品溶液加入到檢測(cè)體系中。

記錄加入過(guò)氧化氫后電流隨時(shí)間的變化，通過(guò)分析電流變化斜率與酶活性的關(guān)系來(lái)確定標(biāo)記物的活性。

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